青光眼相关性诊断方法的研究论文

青光眼相关性诊断方法的研究论文

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研究背景眼科最常见致盲眼病有白内障、青光眼、糖尿病视网膜病变和黄斑病等，其中青光眼是继白内障后的第二致盲原因，物流开题报告毕业论文。我国青光眼的发病率为，患病人数约为700万。2006年资料显示世界青光眼发病人数到20xx年将达到7000万，双眼盲目人数达到840万(Quigley et al.，20xx)。众多的青光眼患者和青光眼盲者，不仅给患者带来极大的身心痛苦，而且还造成社会和经济的巨大负担，因此，预防、控制及治疗青光眼十分重要且迫切！青光眼是一种由于病理性眼压增高导致的具有特征性视神经结构损伤和视野缺损为表现的神经性退行性视神经病变，其最终的结局是视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡、视功能逐渐丧失(Buckingham et al.，20xx)。

目前已有大量保护RGCs的研究结果，主要包括：改善视乳头微循环、谷氨酸途径抑制剂、神经营养因子，诱导热休克蛋白表达及抗氧化治疗等。然而，青光眼的发病机制至今尚未完全阐明。信号转导、受体通道研究在RGCs损伤与保护中的作用近年来正得到关注。最新的研究方向和靶点之一是关于能感受压力的受体通道可能参与传递病理刺激造成神经损伤(Quigley et al.，2006)。TRPC6(Transient receptor potential，C6)是一个新发现的、压力敏感、参与神经元存活与凋亡的钙离子通透膜通道蛋白。

本人曾参与课题"TRPC6通道在视网膜缺血再灌模型中对视网膜神经节的保护作用"的研究，并获得了有价值的前期研究结果：较为全面而精确的定位了TRPC6通道基因和蛋白在SD大鼠视网膜、尤其是RGCs上的表达和分布，TRPC6在RGC层上有选择性的高表达；探讨了TRPC6在大鼠视网膜缺血再灌(Ischemia reperfusion,IR)损伤过程中的表达变化，TRPC6基因和蛋白在视网膜缺血损伤中的再灌注后24小时，出现一过性的表达升高；在体的药理学实验结果显示，其激动剂OAG具有保护视网膜IR模型诱导的RGCs免受损伤，而拮抗剂SKF96365则促进了RGCs凋亡的发生，本研究拟进一步探讨TRPC6的作用机制。研究发现，脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)与TRPC通道在信号转导、调控细胞存活的过程中有密切的联系。

20xx年4月中国科学院上海神经科学研究所王以政研究员课题组在Nature Neuroscience上发表论文，首次证实过表达TRPC6/TRPC3可保护小脑神经元对抗因血清剥夺而导致的细胞死亡，且发现BDNF位于TRPC3/6介导的细胞保护信号通路的上游(Tai et al.，20xxa；Jia et al.，20xx)。本课题拟探讨BDNF介导TRPC6通道蛋白保护视网膜跟模型诱导的RGCs免受损伤的作用机制，对深入阐明青光眼的发病机制，为临床干预治提供新的思路和药物干预靶点，具有一定的现实意义。

本课题的研究主要分为以下二部分：

第一部分视网膜IR模型中调控TRPC通道时BDNF的表达变化

一、研究目的

在SD大鼠视网膜IR模型中检测bdnf基因不同再灌注时间点的表达变化，同时检测抑制TRPC通道时BDNF蛋白水平变化、探讨其表达类型对RGCs凋亡的影响。

二、研究方法

1、在视网膜IR模型中检测bdnf基因的表达。采用视神经血管钳夹法建立视网膜IR模型，夹闭视网膜血供60分钟，分别于再灌注后3小时、24小时、48小时、7天处死大鼠，摘取眼球，显微镜下剥离视网膜，提取视网膜总RNA，利用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定bdnf基因表达变化。

2、抑制TRPC通道时检测BDNF蛋白的表达。建立大鼠视网膜IR模型，于视网膜缺血术前30分钟，右眼通过玻璃体腔注射TRPC拮抗剂SKF96365为实验组，左眼注射溶剂PBS为阴性对照组，分别于再灌后3小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时处死大鼠，摘取眼球，显微镜下剥离视网膜，提取视网膜总蛋白，蛋白质免疫印迹(Western blot)检测BDNF在视网膜组织中的蛋白表达水平，开题报告《物流开题报告毕业论文》。

3、抑制TRPC通道时检测bdnf基因的.表达。将SD大鼠分为4组，分别进行如下处理：

第一组，对眼球进行假手术，只行视神经分离术，不行视网膜缺血手术；

第二组，建立视网膜IR模型；第三组于视网膜缺血术前30分钟，通过玻璃体腔注射PBS溶液，然后再建立视网膜IR模型；第四组于视网膜缺血术前30分钟，通过玻璃体腔注射注射SKF96365，然后再建立视网膜IR模型。所有大鼠于再灌注后24小时处死，摘取眼球，显微镜下剥离视网膜，提取视网膜总RNA，Real-time PCR测定bdnf基因表达变化。

三、研究结果

RT-PCR及Real-time PCR结果显示bdnf mRNA在再灌注后3小时开始出现升高，24小时出现表达高峰，是对照组的倍(p<，N=6)；Western blot结果显示应用SKF96365抑制TRPC通道后，BDNF的前体蛋白(precursor for BDNF，proBDNF)表达量升高，并于再灌注后24小时达到高峰，是对照组的倍(p<，N=6)，而成熟型BDNF(mature BDNF，mBDNF)在整个再灌注过程中未见明显变化。缺血再灌注24小时，IR+SKF96365组bdnf的基因表达水平分别是假手术组、IR组、IR+PBS组的、、倍，与IR+PBS组有统计学差异(p<，N=6)。四、小结在IR模型中，bdnf基因的时间表达谱早于trpc6(trpc6的mRNA水平在再灌后是12小时开始升高)，提示BDNF可能位于TRPC6介导的细胞保护作用的上游。当TRPC通道受到抑制时，bdnf的基因水平和proBDNF蛋白水平都升高，表明bdnf的转录和翻译水平都有提高，但mBDNF没有变化，提示TRPC通道反馈性影响BDNF翻译后修饰的过程。

第二部分ProBDNF-p75NTR信号通路在视网膜IR模型诱导的RGCs损伤中的作用

一、研究目的探索p75NTR信号通路在视网膜IR诱导的RGCs损伤中的作用。

二、研究方法使用荧光金(fluorogold，FG)通过上丘注射对活体SD大鼠RGCs进行逆行标记，在充分标记后(7天)，建立视网膜IR损伤模型，于视网膜缺血术前30分钟通过右眼玻璃体腔注射p75NTR信号通路拮抗剂TAT-pep5进行干预，且同时左眼注射溶剂DMSO为阴性对照，分别于再灌后24小时、48小时、72小时、7天处死大鼠，常规心脏灌流取视网膜，平铺后荧光显微镜下行RGCs计数，对结果进行统计分析。

三、研究结果统计分析结果显示，在再灌注后48小时，玻璃体腔注射p75NTR信号通路拮抗剂TAT-pep5组较之注射溶剂DMSO对照组显著增加RGCs的数目(p<，N=6)。

四、小结在IR模型中proBDNF-p75NTR信号通路可能参与抑制TRPC通道诱导的促进RGCs死亡的过程。结论本研究提示BDNF可能是TRPC6通道蛋白保护视网膜IR模型诱导的RGCs免受损伤的上游通路，当TRPC通道受到抑制时，能反馈性影响BDNF转录后翻译修饰的过程，导致proBDNF量的累积，提高与p75NTR受体结合率，从而诱导促进RGCs死亡。这一发现有助于增进我们对青光眼发病机制的认识和研究，并为临床上进行药物干预和治疗提供新的思路和途径。

关键词：青光眼；脑源性神经营养因子(BDNF)；TRPC6离子通道；视网膜缺血再灌注(IR)损伤；视网膜神经节细胞(RGCs)；神经保护。

青光眼的基本检查法包括四方面：眼压测量，房角评价，眼底视盘和神经纤维层判读，视野判读。本文将分别讨论针对基层眼科医师的四种基本检查法目前在临床应用方面存在的误区和基层眼科需要重视并开展的工作。1眼压测量眼压是青光眼最基本的测量参数。大部分青光眼是由于眼压升高导致视神经、视野出现特征性损害的一组疾病，因此获得较为准确的眼压数值对于青光眼的诊治非常重要。临床工作中经常出现的问题是基层眼科医师根据1次或2次患者的眼压测量值高于正常值，即诊断为青光眼，并行手术治疗，出现这种情况是由于不了解眼压测量的基本原理以及不清楚如何解读眼压的测量结果。目前眼压计的设计原理均是根据Imbert-Fick原理设计的，这一原理假设眼球是一个理想的球体，角膜和巩膜的物理特性一致，角膜本身不具有弹性，泪液无表面张力，给予眼球压力时，眼球容积不会发生改变；此时给予眼球一个与眼内压力平衡的外界压力时，这一外界压力即为眼内压力。但在现实生活中，上述条件均不存在；因此，所有的眼压计获得的眼压值和真实眼压有一定差距。如果不理解眼压测量的基本原理和不同眼压计的优缺点，即易出现误诊。目前临床上应用的眼压计主要分为两种：压陷式眼压计和压平式眼压计。压陷式眼压计主要以schiotz眼压计为代表，其特点为：操作简单，易携带，价格低廉，患者卧位检查；缺点为：误差较大，测量时需接触角膜，有感染的风险。schiotz眼压计主要应用于偏远地区，先天性青光眼或老年卧床患者。使用schiotz眼压计减少误差的关键是测量后应校正测量结果，相关表格可于《临床青光眼学》查到。压平眼压计的主要代表为Goldmann眼压计，Goldmann眼压计是目前眼压测量的“金标准”，是测量结果最接近于真实眼压的测量设备。但其价格较贵，需要安装在裂隙灯上，不易携带，学习曲线较长，测量时与角膜接触，易损伤角膜。Goldmann眼压计的测量结果需根据角膜厚度进行校正。非接触眼压计是目前应用较多的一类眼压计，其特点为：不接触角膜，无感染风险，操作简单，学习曲线短，容易掌握，其缺点为：价格昂贵，测量误差有时较大，不易携带。在基层医院眼科具备schiotz眼压计即可很好地开展工作。同时需要注意的是眼压测量单次结果并不能说明问题。由于眼压和血压等其他机体参数一样，具有昼夜节律的改变，因此，在青光眼特别是原发性开角型青光眼的诊断和治疗随访中，24小时眼压测量具有非常重要的意义。眼压测量的结果还需同时结合眼底和视野改变，如果具有特征性的青光眼眼底和视野改变，才能诊断为青光眼。2房角检查法房角是眼内房水外引流出眼球的重要结构，房角组织的任何改变均可能造成眼压的变化。房角镜检查是对房角结构进行观察的重要手段。房角镜不但可以判断房角的关闭和开放，还可以观察小梁网色素沉着、小梁网血管、小梁网上的炎性细胞等，因此，其在青光眼诊断中的作用不可替代。由于房角镜检查的学习曲线较长，同时近年UBM的广泛应用，很多临床医师使用UBM检查替代房角镜检查，不重视房角镜的学习和使用，造成目前广大基层眼科医师甚至较大医院的眼科医师未能掌握房角镜检查法。UBM是利用高频超声对眼前节进行成像，观察房角的开放程度和虹膜睫状体的形态。由于UBM没有改变房角的形态，可以被认为是房角的静态检查，同时UBM不能观察到360°房角的关闭情况，只能获得4个或8个房角切面图，因此观察范围较房角镜小，也不能观察到小梁网色素沉着及小梁网新生血管等改变，并且对于房角贴附性关闭，UBM亦不能判断，但利用房角镜的动态检查法即可鉴别。综上所述，房角镜检查是UBM不能替代的，同时房角镜价格低廉，易携带，适合基层医院使用。UBM的优点为能够判断房角关闭的机制，同时还能够观察虹膜后的结构，为原发性闭角型青光眼的下一步治疗提供指导建议。房角镜和UBM在临床上是互补关系，由于UBM价格较昂贵，在基层医院眼科，掌握房角镜检查法即可满足对青光眼的诊断。3眼底视盘和神经纤维层观察青光眼特征性眼底视盘和神经纤维层改变是青光眼诊断的核心。最近的美国视觉与眼科研究协会（ARVO）会议上世界青光眼协会原发性开角型青光眼共识已将特征性眼底视盘和神经纤维层改变作为青光眼诊断的唯一要点。这也是基层眼科医师诊断青光眼的难点之一。青光眼特征性眼底视盘和神经纤维层改变包括杯盘比扩大、盘沿切迹、盘沿线状出血、神经纤维层楔状缺损等。使用直接检眼镜观察眼底，放大倍数大，但没有立体感，对于视杯边缘的判断较为困难。目前建议使用裂隙灯前置镜观察视盘，除可获得清晰的立体图像外，对视杯边缘、血管走行、盘沿切迹的判断均优于直接检眼镜。前置镜价格低廉，借助裂隙灯即可使用，简单方便，适合基层眼科医师使用；唯一的缺点是成像为倒像，初学者需要一定的时间学习掌握。4视野判读青光眼特征性视野改变是青光眼诊断的标准之一。目前常用的视野为电脑静态视野，主要评价30°范围内视网膜光敏感度的变化。视野判读存在的问题在于很多临床医师主要根据视野结果中的灰度图判断视野损害的严重程度，灰度图是根据视野的原始数据图产生的，其中白内障、玻璃体混浊等屈光间质的因素会影响灰度图的结果，因此单纯根据灰度图判断青光眼视野损害程度存在误差。对视野的判读首先应阅读视野质量控制参数，判读视野结果的质量是否可信，这些参数包括固视丢失、假阳性和假阴性。如结果可信，方可进行下一步判读，如结果不可信，需患者重新复查视野。当质量控制参数显示结果可信后，需要关注的是模式偏差概率图中的监测点的光敏感度下降的概率，同时还应关注半侧视野比较参数、平均光敏感度变异和模式偏差变异，根据上述结果判读视野是否正常，是否属于青光眼视野改变。

确诊青光眼需要做的检查主要包括：1、裂隙灯检查，检查时有一束 裂隙状的强光源照射到眼睛，通过显微镜的放大作用可以观察到眼球 的结构，据此医生可以了解是否出现青光眼的改变；2、眼压检查： 眼压增高是青光眼的重要危险因素，绝大多数青光眼患者也表现为眼 压升高。3、眼底检查：青光眼主要损害的是视神经，视神经汇聚在 眼底，因此需要做眼底检查，观察视神经损害的严重程度。4、视野 检查可以直接了解视神经的功能，判断视神经受损的程度。5、前房 角检查：青光眼有开角型和闭角型之分，所谓何种类型是要通过房角 检查来明确的，只有有了正确的分类才能给予相应的正确治疗。

肺癌相关抗体诊断肺癌的论文研究

参考文献：Iams, ., Porter, J. & Horn, L. Immunotherapeutic approaches for small-cell lung cancer. Nat Rev Clin Oncol (2020). FDA批准了化疗联合PD-L1抑制剂atezolizumab作为小细胞肺癌的一线治疗，纳武单抗和帕博利珠单抗作为小细胞肺癌的单药三线治疗。从此，免疫检查点抑制剂登上了小细胞肺癌治疗的舞台。几十年不变的治疗策略终于迎来改变。 小细胞肺癌有自身的免疫学特点和分类。首先，小细胞肺癌的肿瘤突变负荷较高，已证实肿瘤突变负荷可以预测免疫治疗效果，鉴于小细胞肺癌对化疗敏感，可以促进免疫抗原的释放，增加t细胞反应，这是将免疫治疗和化疗结合应用于小细胞肺癌的理论基础之一。 回顾性研究发现，在接受免疫治疗前样本里具有更多的浸润性T细胞，治疗效果越好。若在小细胞肺癌患者里面细分，调节性T细胞在未进展的患者中和更好的预后相关。CD45记忆性T细胞在脑转移患者里面和更长的生存率相关。患有神经性PNS的SCLC患者和患有内分泌性副肿瘤综合征（PNS）的SCLC患者以及未患有副肿瘤综合征的SCLC患者相比，前者的PD-1 / PD-L1相互作用评分显着提高，且具有CD4和CD8浸润增加的趋势，浸润率更高，OS有所改善。而在广泛期患者中，PD-L1高的患者具有更好的临床结果。综上，SCLC的肿瘤免疫浸润和更好的治疗结果有关。 初步临床试验发现80％的SCLC肿瘤的PD-L1染色少于1％。这与SCLC中高的肿瘤突变负担不一致，暗示SCLC肿瘤拥有独立于PD-1 / PD-L1的免疫逃避方法。因此，对于小细胞肺癌的免疫微环境，还需要进一步的了解。 SCLC细胞可分为四个主要的分子亚型。这些亚型可由RNA测序得到： ,高水平的achaet -scute同源物1 (ASCL-1)表达为特征 ,高水平的神经源性分化因子1（NeuroD1)表达为特征 ,表达转录共激活因子YAP1 ，表达POU2类结构域 2类转录因子3 (POU2F3)表达 未来的研究应明确这些SCLC亚型与免疫生物学特征之间的关系，并考虑选择特定分子亚型的前瞻性临床试验设计。最初的三期临床试验尝试使用ipilimumab（CTLA-4单抗）联合化疗比较单纯化疗，结果不如人意。这项2016年的研究得出，免疫治疗联合化疗组的OS,PFS,ORR并没有提升。 随后2018年的IMPower133带来曙光，IMpower133是一项国际、双盲、随机、安慰剂对照的III期试验，评估在卡铂和依托泊苷中添加Atezolizuma（商品名TecentriqPD-L1单抗）后，一线治疗的疗效和安全性。此研究共招募了403例初治的 ES-SCLC患者。结果是OS,PFS均得到改善，然而ORR依然没有区别。不过，2019年3月18日，罗氏宣布，FDA已批准Tecentriq联合化疗(卡铂和依托泊苷)，用于一线治疗广泛期小细胞肺癌。 2019年的CASPIAN试验更进一步。患者被随机分成三组： （PD-L1单抗）+Tremelimumab（CTLA-4单抗）+化疗，化疗4周期结束后继续用durvalumab ±treme直到进展；   +化疗，化疗4周期结束后继续用durvalumab直到进展； 3.化疗4-6周期。 在durvalumab组中，患者接受至多4个周期的化疗，而化疗组允许至多6个周期的化疗和预防性颅内照射。与单用化疗相比，durvalumab联合化疗能显著提高患者的OS，并且这一临床获益具有统计学意义。相较于单纯化疗组的OS（个月），durvalumab联合化疗组的OS达到了个月。不光OS得以提升，ORR也具有优势（）。值得注意的是，IMPower133和CASPIAN的试验略有不同，后者是非盲且允许使用顺铂，但这两个试验的生存数据几乎相同。 这些结果表明，前期化疗加上针对PD-1或PD-L1的ICI作为ES-SCLC患者的治疗策略取得了成功。大约10%的SCLC患者会发展成PNS（副肿瘤综合征），神经系统的PNS被认为是自身免疫性后遗症。考虑到自身模拟激活的可能性，在接受IMPower 133或CASPIAN联合化疗的患者中，未观察到PNS或其他3、4级不良事件的显著增加。此外，其他与治疗相关的不良事件的类型和发生率与ICIs联合化疗的NSCLC患者相似。 一线维持治疗的两个临床试验结果都不尽如人意。2018年一项单臂二期试验在广泛期患者中，化疗后使用K药维持治疗，然而PFS,OS,ORR都未得到显著提升。随后2019年的三臂三期试验CheckMate451，比较O药联合ipilimumab，单药O药和安慰剂用于维持治疗，OS,PFS无显著提升，但在亚组分析里，化疗后5周内使用纳武单抗的患者OS有提高，提示化疗后短时间内肿瘤抗原的暴露可以提高免疫治疗的效果。 之前的NCCN并未对SCLC三线或后线治疗提供具体建议，而是建议参加临床试验作为首选。真实世界的研究数据显示，接受各种各样三线治疗的小细胞肺癌患者，其客观缓解率（ORR）为，中位缓解持续时间（DOR）为个月，中位总生存时间（OS）为个月，1年生存率仅为11%。 FDA根据来自CheckMate 032的数据批准Nivolumab用于小细胞肺癌三线或一线以后的治疗。CheckMate 032是1/2期，多中心，开放标签研究入组研究，比较了nivolumab和nivolumab加上ipilimumab治疗先前接受过化疗治疗的SCLC或其他晚期/转移性实体瘤，无论其PD-L1水平如何。在109例接受三线或以后三线nivolumab单药治疗的患者中，ORR为％。PFS中位数为个月，OS中位数为个月。 CheckMate331是一项III期临床研究，对比纳武利尤单抗（O药）与化疗二线治疗小细胞肺癌的疗效。对于整体患者来说，中位OS为O药vs化疗为个月个月，HR为。该结果也宣告O药二线治疗SCLC的失败ORR：对于整体患者来说，O药vs化疗为。O药治疗的有效率低于化疗组，O药使用的无进展时间低于化疗组。 KEYNOTE-028研究和KEYNOTE-158研究已经证明，PD-1单克隆抗体帕博利珠单抗（Keytruda）单药疗法在先前接受治疗的广泛期小细胞肺癌的中显示出抗肿瘤活性。Keynote028中患者接受K药10mg/kg，q2w；keynote158中患者接受K药200mg，q3w。两项研究中共83例符合疗效分析（keynote158，n=64；keynote028，n=19）。KEYNOTE-028中，只包括肿瘤细胞免疫浸润和PD-L1联合阳性评分(CPS)≥1%的患者。在24例复发的SCLC患者中，ORR为33%，中位PFS为个月，中位OS为个月。在keynotes -158中，包括107例复发性SCLC患者，ORR为，PFS中位数为2个月，OS中位数为个月。 IFCT-1603是随机的II期临床试验，旨在评估一线铂-依托泊苷化疗后SCLC中atezolizumab的效果。Atezolizumab的中位无进展生存期为个月，化疗为个月。两组之间的总生存期无明显差异。中位总存活为个月和个月。Atezolizumab单一疗法在复发性SCLC中未能显示出明显的疗效。 综上所述，尽管三线治疗采用免疫疗法单药有优势，但是二线治疗试验都宣告失败。因此FDA批准ICI单药治疗，包括O药或K药，仅在三线或更晚的情况下使用。这个指标被认为可能是对ICIs反应的预测生物标志物，在SCLC患者的一线治疗和维持治疗以及二线或后期治疗中都是如此。在肿瘤细胞或免疫细胞上PD-L1表达≥1%或≥5%的患者中，化疗+atezolizumab单抗与化疗+安慰剂组相比，OS无明显改善。在肿瘤和免疫细胞PD-L1表达均<1%的患者中，接受化疗加atezolizumab单抗与化疗加安慰剂的患者OS均有统计学意义上的改善(中位OS分别为个月和个月)。这些不一致的发现提示，PD-L1表达对SCLC一线使用ICI合并化疗的OS无预测作用。 PD-L1的表达也在二线或后期复发的ICI患者中进行了评估。在CheckMate 032，O药单药治疗组中，PD-L1≥1%的患者的ORR为38%，而PD-L1 <1%的患者的ORR为28%，不可评估的肿瘤患者的ORR为24%。在O药 1 mg/kg和ipilimumab 3 mg/kg组中，这些亚组的ORRs分别为33%、36%和33%。相比之下，在O药3 mg/kg和ipilimumab 1 mg/kg arm5的这些亚组中，ORRs分别为60%、24%和15%。在IFCT-1603 II期RCT中，患者接受atezolizumab或二线化疗后，53个可评估的标本中，只有1个标本有>1%的肿瘤PD-L1表达，因此排除了对其进行预测价值评估的可能性。 keynotes -028中≥1%的CPS是K药治疗的纳入标准。这些患者的ORR为33%。一项调查K药单药治疗疗效的试验，包括CPS低至0%的患者(CPS的评估方法与KEYNOTE-028相同)。将患者分为两组:CPS≥1% (n = 42)和CPS <1% (n = 50)。ORRs分别为和6%，1年OS分别为和，OS的中位数为个月和个月。在PD-L1状态不明的患者中，ORR为27%。由于小细胞肺癌中肿瘤细胞PD-L1的整体表达水平较低，因此，该免疫检查点的表达不太可能对ICIs的有效性具有预测价值。 一份来自不同组织的实体肿瘤患者的肿瘤材料的分析报告显示，包括8例SCLC患者在内，在KEYNOTE-028接受K药治疗的患者中，TIL标记与ORR和中位PFS相关。这种TIL标记是基于一个18个基因的RNA表达，但是由于SCLC患者数量有限，很难对这种标记在SCLC患者中的预测效用做出具体的结论。 病人数目到目前为止非常小,需要进一步的验证。 在CheckMate 032中，调使用配对的血液和预处理肿瘤样本评估TMB。全外显子组测序(WES)被用来量化TMB，<143突变为低，143 - 247突变为中等，≥248突变为高。当比较接受O药单药治疗的TMB 患者的疗效时，低(n = 42)、中(n = 44)和高(n = 47) TMB患者的ORRs分别为5%、7%和21%;PFS中位持续时间为个月、个月和个月;OS持续时间中位数分别为个月、个月和个月;1年PFS无法评估，分别为3%和21%;1年OS分别为22%、26%和35%。对CheckMate032的O药 1 mg/kg和ipilimumab 3 mg/kg臂的数据分析显示了类似的结果。同一TMB三分位数中，低(n = 27)、中(n = 25)和高(n = 26)的ORRs分别为22%、16%和46%;中位PFS持续时间分别为个月、个月和个月;中位OS分别为个月、个月和22个月;1年PFS分别为6%、8%和30%;1年的OS分别为23%、20%和62%。来自于keynoteo -028中接受K药治疗的患者中，与Checkmate 032相似，TMB、ORR和PFS中位数之间存在统计学显著相关，但TMB与PD-L1之间的相关性有限。由于本队列中SCLC患者数量较少，因此很难从这一分析中得出TMB作为预测生物标志物的可靠结论。 在IMPower 133中，接受化疗加atezolizumab单抗的254例无肝转移的患者与仅接受化疗的患者相比，OS获益有统计学意义(中位OS分别为个月和个月）。III期RCT评估化疗加ipilimumab与单纯化疗对初治ES-SCLC患者的疗效时，无论是否存在肝转移，OS均未发现明显差异。CheckMate 331中，364例无肝转移的复发性SCLC亚组再次观察到，与化疗相比，O药组的OS有显著改善。免疫治疗位点一览：免疫检查点抑制剂(抗程序性细胞死亡蛋白1 (PD-1)、抗程序性细胞死亡配体1 (PD-L1)、抗细胞毒性T淋巴细胞蛋白4 (CTLA-4) 、抗-LAG3抗体、 抗-TIM3抗体),双特异性抗体(比如针对CD3 + DLL3或者PD-1加上TIM3),设计T细胞疗法(如抗-DLL3的CAR-T),肿瘤疫苗、抗增殖剂(AKT抑制剂)和DNA损伤修复疗法(ADP-ribose聚合酶(PARP)抑制剂,ATR抑制剂、WEE1抑制剂)。BiTE, bispecific T cell engager; DC, dendritic cell; TCR, T cell receptor. TMB显示出了一些作为反应率和OS的预测值的价值。分析材料(肿瘤与血液)和分析技术(WES与靶向基因检测)的差异很关键;因此，TMB仍是进一步研究的潜在预测指标。 SCLC的挑战仍然是获得足够的组织来进行实体肿瘤材料的分析。目前，其他潜在的预测生物标志物，如肿瘤基质PD-L1表达、CTCs和TIL标记，仅在一小群患者中进行了评估，因此排除了对其预测价值得出可靠结论的可能性。同样，在指导ICIs的使用时，应谨慎解释肝转移的存在或不存在，因为该预测因子的有效性仅在亚组分析中评估过。使用多参数的组合预测疗效,比如PD-L1+肿瘤突变负荷+其他有待确定因素，可能提供最好的治疗策略。 虽然在使用免疫疗法治疗SCLC患者方面取得了进展，但在确定最佳治疗策略和预测生物标志物以及为ICIs疾病进展患者制定有效的治疗策略方面仍有大量的研究工作要做。

烟酒对青光眼的影响研究论文

据美国医学协会杂志一份调查报告证实，吸烟者罹患严重的视力减弱症的机会倍增于不吸者。该报告可能进一步激励吸烟者戒烟。此项历时长久的调查研究是由对不同的对象小组研究组合而成。其中一部分是根据哈佛公共卫生学院研究人员于过去16年在观察12万名美国登记护士的健康情况所得。据称，每日抽一包以上香烟的妇女罹患斑点退化的机会比不抽烟者高两倍，而斑点退化正是视力减弱以及年长者失明的致因。另一组对两万多名男士民的调查显示，吸烟亦会增加男士视力减弱的机会。吸烟之所以危害视力，一方面是减少眼内血液的流量，另一方面是增加眼的氧游离基，而后者是损害视网膜的祸首。此外，吸烟者体内反氧化剂（如食品中的维生素C）水平多数较低，且他们较少定时锻炼身体。据中国国际广播电台报道，瑞典科学家最近公布的一项最新研究结果表明：香烟中的尼古丁能够影响人体眼部视网膜中的血液循环，并会严重影响人在黑暗环境中的视觉水平。据土耳其《自由报》13日报道，瑞典马尔默大学眼科医院的医生们对吸烟者和不吸烟者两组实验人群进行了观察研究。研究主要集中在测量被观察对象在明亮和黑暗环境中视网膜的血液循环情况。按照正常情况，人处于黑暗环境中时，为了看清物体需要消耗更多的能量，因此视网膜中的血液循环会随之加快。但马尔默大学的科学家通过研究发现，不吸烟者视网膜中的血液循环会随周围环境的变黑而加快，而经常吸烟者视网膜中的血液循环却不会出现任何变化长期吸烟的人可引起视力下降、视野缺损，严重者可引起视神经萎缩，而最终将导致失明。所以，吸烟是危害视力的重要原因之一，医学上称为“烟中毒性视神经病变”。据统计，由烟中毒引起的视力减退在英国占眼科病人 的 1．％，美国为 0．6％，在我国则占原因不明视力减退病人的 4．8％。因此， 值得吸烟者引起注意，不要低估吸烟对眼睛的危害。吸烟为什么会引起视神经中毒？这是因为烟草点燃后可挥发出几十种有害物质，其中一种为氰化物。氰在身体中可变成毒性小的硫氰化合物由尿排出。但是长期吸烟或大量吸烟后，吸人体内的氰化物贮留增多，当身体解毒功能发生障碍时便发生中毒。特别是当吸烟者消化系统功能不好，体内维生素 B12 吸收减少或食物中维生素 B12 不足时，则可促使中毒发生吸烟对视力的影响主要表现在以下方面：一、导致烟毒性弱视这是吸烟对眼睛最常见的危害。弱视，就是矫正视力低于屈光度。吸烟会导致弱视的原因，一方面是由于吸烟时人体吸入的氧气被消耗，致使血中氧的含量下降，而眼视网膜对缺氧格外敏感，长期下去，视神经纤维会发生变性，视网膜乳头黄斑区也会发生萎缩；另一方面，烟草燃烧时产生的烟焦油会导致体内维生素B的含量下降，而维生素B12是维持视神经正常功能所必须的营养物质。这两者共同的影响，使得吸烟者视力下降而发生弱视，严重者可致失明。二、可能导致白内障据医学家调查，在白内障病人中有20％与长期吸烟有关。也有人观察到，每天吸烟20支以上的人与不吸烟者相比，患白内障的可能性要高2倍，且吸烟是越大，患白内障的可能性越大。三、吸烟时吸入的尼古丁及一氧化碳等有害物质会使血管收缩、血小板凝集力亢进，由此导致视网膜中央血管栓塞、黄斑变性等等致盲性眼病的发生。临床还观察到，吸烟者有时会有一过性眼压升高的现象，这在青光眼患者中尤为明显，青光眼病人本来眼压就高，如果再吸烟，无疑是雪上加霜。 你想要保有一双明亮的眼睛吗？ 那就请你立即戒烟！不吸烟者视网膜中的血液循环会随周围环境的变黑而加快，而经常吸烟者视网膜中的血液循环却不会出现任何变化。马尔默大学眼科医院的哈维柳斯教授说，香烟中的尼古丁还会导致血管变窄、血液携氧能力降低。英国曼彻斯特大学一项研究显示，从54000名老年黄斑病变患者（age－relatedmacularde�generation，简称AMD）发现，逾四分一是因为长期吸烟习惯，导致视力损坏，继而老年后罹患AMD，当中的17800人更属完全失明。负责这项研究的SimonKelly指出，AMD多发生于60岁以上长者身上，肇因与吸烟息息相关。有防盲及反吸烟团体，建议在烟包上列明有关警告语句，与心脏病及癌症看齐。

一是会造成视网膜病变，人体氧气因为吸烟而被消耗，致使血氧含量降低，视网膜缺氧体现最为明显；二是造成慢性结膜炎，这主要就是吸烟时烟雾的长期刺激而导致的。三是造成青光眼，主要是吸烟会引起患者眼压过高；四是会引起白内障；五是产生弱视，烟中的尼古丁会消耗人体内大量的维生素b12，这就会对人体的视神经功能产生影响出现异常，造成视力明显减弱。

嗜烟过度会产生视力的减退，严重的甚至形成中毒性的弱视。因为吸烟会产生毒素侵犯到视神经节细胞和视神经通路上，影响到视野，患者可以感觉到在视力中心有相对的暗点，或者在早期部分人可能会有一些色觉障碍，尤其对红色更为敏感。另外，抽烟或者喝酒的人，体内维生素b族缺乏，也会加重神经系统的改变。总之吸烟主要是对眼睛视神经有严重危害。

问题分析：你好，青光眼是一种病理性高眼压所引起的可治愈性的眼科常见病。发病机理主要是房水循环障碍，导致眼压急剧上升而引起头痛。目前常用于治疗青光眼的药物，有毛果芸香碱（匹罗卡品），青光胺、噻吗心胺（噻吗洛尔）和乙酰唑胺（醋唑磺胺、醋氮酰胺）等，病情严重者需手术治疗。意见建议：抽烟的危害性很大。最好不要抽。如果抽烟可能会加重病情。

研究葛根素治疗青光眼论文

青光眼其实不是一个病，而是一组疾病，主要是跟眼压有关系，眼压超过了每个人视神经所耐受的程度，引起了视神经的萎缩，视野逐渐缩小，最后会引起失明这样的一组疾病，而且它是视神经萎缩引起的失明，是不可逆的，跟白内障这些病不同，青光眼一旦失明了就不可恢复。

青光眼为眼内压调整功能发生障碍使眼压异常升高，因而视功能障碍，并伴有视网膜形态学变化的疾病。因瞳孔多少带有青绿色，故有此名。在日常生活中，青光眼患者应该每天都参加一些适量的、有效的有氧运动。运动可以使人体内血液发生重新分布，流入肌肉组织的血液增加，而流入分泌房水的睫状体的血液减少。另外，建议每天喝一些郑玖味瞳仁茶 ，可以辅助调理改善青光眼，降低眼压，促进眼部新陈代谢，缓解眼部疲劳。

[b]功能主治[/b]1．营养心肌，扩张血管葛根总黄酮和葛根素能改善心肌的氧代谢，对心肌代谢产生有益作用，同时能扩张血管，改善微循环，降低血管阻力，使血流量增加，故可用防治心肌缺血，心肌梗死，心律失常，高血压，动脉硬化等病症。2．解肌发表葛根丙酮提取物有使体温恢复正常的作用，对多种发热有效。故常用于发热口渴，心烦不安等病症。3．降糖降脂葛根素有明显的降低血糖的作用，葛根所含的黄酮类化合物有降血脂作用，能降低血清胆固醇，降低油三酯，用于治疗高血糖，高血脂病症，有显著疗效。4．益智作用某些研究表明葛根对学习记忆障碍有明程的治疗作用，葛根醇提取物能显著对抗东度警碱所致的记忆障碍。可用于治疗老年性痴呆，智力障碍，记忆力差等病症。5．升举阳气，止渴止泻葛根轻清升散，药性升发，柳举阳气，鼓舞机体正气上升，津液布行。升发脾胃清阳空气而止渴，止泻痢。故常用于治疗内热消渴，麻疹透发不畅，腹泻、痢疾等病症。 [b]适宜人群[/b]老少皆宜，特别适用下列人群：高血压、高血脂、高血糖及偏头痛等心脑血管病患者、更年期妇女、易上火人群（包括孕妇和婴儿）、常用烟酒者、女性滋容养颜，中老年人日常饮食调理等。营养价值[1]葛根的营养价值葛根内含12%的黄酮类化合物，如葛根素、大豆黄酮苷、花生素等营养成分，还有蛋白质、氨基酸、糖、和人体必需的铁、钙、铜、硒等矿物质，是老少皆宜的名贵滋补品，有“千年人参”之美誉。早在汉代张仲景的《伤寒论》中就有“葛根汤”这一著名方剂，至今仍是重要的解表方。《本草正义》谓葛根“最能开发脾胃清阳之气”。葛根味甘微辛，气清香，性凉，主入脾胃经。有发表解肌，升阳透疹，解热生津之功效。用于治疗脾虚泄泻、热病口渴、主治外感发热，头项痛强，麻疹透发不畅，温病口渴，消渴，酒毒，胸痹心痛等病症。常食葛粉能调节人体机能，增强体质，提高机体抗病能力，抗衰延年，永葆青春活力。现代医学研究，葛根黄酮具有防癌抗癌和雌激素样作用，可促进女性养颜，尤其对中年妇女和绝经期妇女养颜保健作用明显。

青光眼通常双眼发病，但是首先在一侧眼晴表现出来。有的患者无任何不适或疼痛的症状，也有的患者的症状很严重，如：视力模糊，头疼或眼疼，恶心或呕吐，灯光周围的彩虹晕及突然失去视力。平时建议每天两杯（玖味瞳仁茶），清肝明目，疏经活络，加速眼部毛细血管的新陈代谢。

mba企业诊断论文的研究法概述

（一）案例研究法案例研究方法在mba毕业论文写作研究中最为常见被应用，它分为个人研究，团体研究以及问题研究。作者可以选择最合适自己的研究类型。选择案例法需要注意的是，不能只叙述事实，还要进行分析案例和总结案例，这样才能够得到更加具有启示作用的结果。（二）诊断研究法所谓诊断研究法，就是要找出研究对象企业存在的经营管理上的问题，研究出原因，提出改进和解决。需要提醒大家的是，诊断研究法选择的诊断对象所存在的问题必须是真实存在的，不可以是虚拟作假的。（三）调查研究法调查研究法是最为常见的mba毕业论文写作研究方法。调查研究法最常见的形式就是问卷调查，这是很多mba毕业生都会选择的方式。毕业生会运用各种有效的科学的方式对调研企业进行分析研究，提出有效的方法，最后总结成mba毕业论文。（四）专题研究法所谓专题研究法，首先需要明确一下研究对象，要找出研究对象存在的现实问题，并且加以详细叙述。其次，要结合理论分析，对所描述的现实问题，要做到有理有据。最后，对所研究的对象进行深入探讨。（五）可行性研究法Mba毕业论文写作研究方法中的可行性研究法的基本要求有些呢？下面就为大家介绍下，第一，要以研究对象的经营，技术或者项目为背景，第二，要突出作者自己的思路和研究过程，第三，mba毕业论文必须覆盖可行性研究的主要内容。（六）实验研究法实验研究法本来主要是用在一些自然科学类专业的研究，不过现在也能广泛用到其他专业的研究，当然，mba毕业论文写作研究方法可以选择实验研究法。需要注意的是，选择实验研究法必须要实验者，实验对象以及实验手段三者结合。（七）质性研究法所谓质性研究法，是不强求有统计，可以在小范围，精心选择的样本进行研究，但是必须凭借研究者的经验以及技术，做到有效分析研究对象。

mba案例研究法有哪些类型的论文

案例研究法就是通过对企业问题的个案进行研究了解管理的实际情况，从而达到提高决策技巧的目的。由于在实际工作中，企业所面临的环境处在不断变化之中，而且影响的因素也特别多，同时各行各业的业务特点也不相同，因此，案例的情况是千差万别，案例的类型也是极其繁多。

案例的分类方法有多种，角度不同，其分类的方法也不同。对于案例研究法的类型，管理学者余菁博士（2004）进行了总结：根据不同的划分标准，可以区分出不同案例研究法的类型，有一些案例研究方法只适用于特定的案例研究类型，也有一些案例研究可以同时综合应用多种案例研究方法。

（一）根据研究任务的不同对案例进行区分类型

根据研究任务的不同，案例研究大体上可分为五大类、四大类或三大类。

首先，案例研究方法可以被区分为五种类型（Scapens,1990;Hussey&Hussey,1997）：探索型、描述型、例证型、实验型和解释型的案例研究法。其中，探索MBA型案例研究往往会超越已有的理论体系，运用新的视角、假设、观点和方法来解析社会经济现象，这类研究以为新理论的形成作铺垫为己任，其特点是缺乏系统的理论体系的支撑，相关研究成果非常不完善。而其他四种类型的案例研究都是在已有的理论框架之下而进行的。如描述型案例研究是在已有的理论框架下对企业实践活动进行详尽的描述的案例研究；例证型案例研究是在巳有的理论框架下阐述企业组织的创造性实践活动或企业实践的新趋势的案例研究；实验型案例研究则是在已有的.理论框架下检验一个企业中新实践、新流程、新技术的执行情况并评价其收益的案例研究；而解释性案例研究则适用于运用已有的理论假设来理解和解释现实中企业实践活动的研究任务。

其次，根据任务的不同，案例研究方法又可区分为探索型、描述型、解释型和评价型四种类型（BaSSey,1999）。其中，探索型案例研究侧重于提出假设，它们的任务是寻找新的理论；描述型案例研究侧重于描述事例，它们的任务是讲故事或画图画；解释型案例研究侧重于理论检验；而评价型案例研究侧重于就特定事例作出判断。

最后，还有一些学者将案例研究方法区分为三种类型，即探索型、描述型和解释型；也有学者将解释型称为“分析型”;另有学者将探索型和描述型之外的案例研究统称为方法组合型案例研究。

以上根据任务不同而对案例研究的分类，虽然有三分类、四分类，甚至五分类等不同的分法，但是，人们对探索型和描述型这两种类型的案例研究的内涵基本没有争议，这两种类型分别对应着超出现有理论框架解释范围之外和完全在现有理论框架解释范围之内的案例研究，而分歧主要集中于那些立足于现有理论框架但又尝试有所突破与发展的案例研究活动的分类及其属性上。

（二）根据研究案例的多少来区分的案例研究类型

根据研究案例的多少，案例研究可区分为单一案例研究和多案例研究两大类型。美国案例研究专家罗伯特_K.殷（2004）提出案例研究设计有单个案例研究与多个案例研究之分。单个案例研究可以用作确认或挑战一个理论，也可以用作提出一个独特的或极端的案例。多案例研究的特点在于它包括了两个分析阶段：案例内分析和跨案例分析。‘通常，单一案例研究不适用于系统构建新的理论框架。单一案例研究主要用于证实或证伪巳有理论假设的某一个方面的问题，它也可以用作分析一个极端的、独特的和罕见的管理情境。而在多案例研究中，研究人员首先要将每一个案例及其主题作为独立的整体进行深入的分析，这被称作案例内分析；依托于同一研究主旨，在彼此独立的案例内分析的基础上，研究者将对所有案例进行归纳、总结，并得出抽象的、精辟的研究结论，这一分析被称作跨案例分析。

除了上述两种案例研究分类外，根据案例研究过程中不同程序、步骤和应用方法的不同，可以区分出多种不同的案例研究类型。例如，根据数据收集方法的不同来区分的案例研究类型。常见的数据收集方法有文件法、档案记录法、访谈法、观察法等。

上述种种不同的案例研究分类，就形成了各种各样的案例研究类型。一般情况下，研究者可以在同一个案例研究中同时运用两种以上的分析方法。

一、论文选题的确定一般而言，只要你有新的观点，新的发现，新的角度，新的研究方法和新的材料等，选择任何一个在专业范围内的题目，都可以写出来。但这“五新”极大地限制了硕士论文选题。因为大多数作者都是第一次写这么长的学术论文，缺乏经验，也缺乏深刻的知识积累，很难把握。同时，两三万字这一条件对选题也有很大的限制，如果题目太大，就不能在这个相对狭窄的范围内展开。因此，选题得当与否，对论文的成功影响很大，甚至有人说，一个好的选题就是成功的一半。基于众多硕士论文的选题经验，一级论文的选题可以从以下几个方面考虑：本专业的研究空白，有争议的课题，比较性的课题，从其他专业角度研究本专业的课题，有新的插入角度的老话题和刚出现的专业新问题。二、对相关理论与研究进行综述这一步的工作难度较大，要有思想准备。目前，国内大部分中文学术资料不能上网，需要人工查找，因此查找中文资料所花的时间和精力可能会很大。拉丁文资料，尤其是英文资料，由于网络传播的便利条件，查询起来比较方便。但有很多资料即使找到目录，想要真正能读懂，还需要不懈努力。三、提出理论假设或研究的具体问题选题是指准备写的论文的方向和范围，真正要动手写作，会遇到两类具体问题。首先是视角问题：我的具体观点是什么?你们可能会提出一个或多个观点，但它们只是一种假设，要通过大量的证据、材料，严密的论证和合理的论证框架，才能证明你们的假设是否是正确的，从而构成了文章的主题。其次是实践性：我要具体说明哪些问题?你可能提出了很多原因，但也有各种环境条件的影响，这些影响是否与所讨论的问题有关，以及其程度，这些都需要通过科学的调查和分析。无论在哪种情况下，论文的中心思想或论题都必须明确，并贯穿始终。